Desarrollo de un ensayo AlphaLISA de interacción proteína-proteína

Para buscar compuestos que interrumpan la interacción proteína-proteína (PPI) entre ACE2 y el dominio de unión al receptor (RBD) de la proteína Spike (S1) del SARS-CoV-2, se seleccionó un ensayo AlphaLISA. Este ensayo basado en proximidad ofrece varias ventajas, incluida la disponibilidad comercial de microesferas donadoras de estreptavidina y microesferas aceptoras de proteína A (figura 1A). Estas permiten evaluar distintas combinaciones de proteínas candidatas con etiquetas Avi y Fc adecuadas. Con este enfoque, debería ser posible identificar fármacos ya existentes capaces de interrumpir la interacción entre ambas proteínas, lo que se traduce en una disminución de la señal de emisión producida.

Para este ensayo AlphaLISA, existe además un útil contra-ensayo que permite descartar falsos positivos (figura 1B). Dado que existe una interacción directa entre las microesferas donadoras y aceptoras, este contra-ensayo resulta eficaz para eliminar compuestos que interfieren en el AlphaLISA, por ejemplo, apagando el oxígeno singlete o absorbiendo la luz de excitación o de emisión.